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ELISA检测试剂盒的操作程序总结
发布时间:2015-04-24   点击次数:963次

    将它们分别进行一系列稀释后,在不同的固相载体上按预定的ELISA检测试剂盒操作步骤进行测定,然后比较测定结果。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果判别zui大,这种载体就是这一试剂盒测定的zui合适的固相载体。

ELISA检测试剂盒的准备和保存 
A. BDNF 标准品的稀释和使用:在使用前 2 小时内准备。 
试剂盒提供 2 管标准品,每管 10ng,每次使用 1 管。 
1. 配制 10,000pg/ml 标准品:取 1ml 样品稀释液加入标准品管内,盖好后静置 10 分钟以上,
然后反复颠倒/搓动以助溶解。 
2. 配制 2000pg/ml 标准品:取 0.2ml 10,000pg/ml 的标准品加入有 0.8ml 样品稀释液的
Eppendorf 管中,混匀,做上标记。 
3. 配制 1000pg/ml→31.2pg/ml 标准品:准备 6 只 Eppendorf 管,每管加 0.3ml 样品稀释液,
分别标记上 1000pg/ml, 500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.2pg/ml。取 0.3ml 
2000pg/ml 的标准品加入标记 1000pg/ml 的管中,混匀后同样取出 0.3ml , 加入下一只管中。
余同此类推,直到zui后一只样品管。 
注意:已经稀释的标准品(10,000pg/ml),应在 12 小时内使用。-20℃冷冻保存条件下,2 天
内可以使用,ELISA检测试剂盒但不得反复冻融。 
B.生物素标记抗人 BDNF 抗体工作液的准备:在使用前 2 小时内准备。 
1. 根据每孔需要 0.1ml 计算总的用量(实际配制时应多配制 0.1-0.2ml)。 
2. 按 1μ ι 生物素标记抗人 BDNF 加抗体稀释液 99μ ι 的比例配制工作液。轻轻混匀。 
C.亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)工作液的准备:在使用前 1 小时内准备。 
1. 根据每孔需要 0.1ml 计算总的用量(实配时应多配制 0.1-0.2ml)。 
2. 按 1μ ι 亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)加 ABC 稀释液 99μ ι 的比例配制工作液。
轻轻混匀。 
ELISA检测试剂盒操作程序 
已稀释好的 ABC 和 TMB 显色液在加入酶标板孔前都应预先在 37℃中平衡至少 30 分钟。试
剂或样品稀释时,切不可忘记混匀。每次检测都应该做标准曲线。用户须估计样品待测因子
的含量,决定适当的稀释倍数。 

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